转自：昭衍JOINN
上一篇《抗体发现技术之单B细胞筛选》介绍了不同的单B细胞筛选技术。那么在筛选到单B细胞后该如何获取对应的抗体分子以及基因序列呢？
抗体编码基因的扩增
分选完单个B细胞后，下一步需要将抗体编码基因序列从目的细胞中调取出来。
分选到单B细胞之后通常是将所获得的单个B细胞分选到含有RNA裂解液的96孔、384孔甚至于1536孔中，再通过PCR将编码抗体的VH/VL序列扩增出来。但这个流程的受限于，很难获得全长的重链和轻链基因，所以在不确定抗体亚型的情况下，一般只嵌合到IgG1和kappa亚型的Fc上。在采用该方法从目的细胞中扩增抗体编码基因，昭衍单B细胞平台可将分选的单B细胞短暂培养，然后再调取基因信息，能够降低扩增抗体编码基因的难度，提高扩增效率。
同样，得益于单细胞PCR技术和NGS技术发展，与单细胞筛选技术相结合，能够快速的获得大量的抗体编码基因信息。除了羊驼、骆驼和鲨鱼等特有单链抗体之外，其它种属的抗体都存在重链和轻链结构，这就使利用常规NGS技术进行建库和测序存在困难，因为无法从获取的几千或上万条重链和轻链编码基因信息中，获得其相互配对的信息。昭衍单B细胞平台结合NGS测序技术，可在单个细胞上面打上一个分子标签，然后将细胞导出，进行单细胞PCR扩增其重链和轻链基因，再利用NGS测序，来获取其基因信息；因为在做单细胞PCR之前，每一个细胞上面已经有了特定的分子标签，因此用含该标签互补序列的引物进行扩增，在对该标签序列进行分析之后，即可获得轻、重链的配对信息（图1）。
（图 1单细胞测序技术获取抗体编码基因信息）
在抗体开发的具体过程中，昭衍抗体发现平台利用流式细胞分选技术，对抗原特异性的B细胞批量分选（bulk sorting），对分选所获得的细胞利用NGS等类似技术平台进行分析，即可快速的获得抗体编码基因的信息，然后进行基因合成、体外重组表达，对所获得的抗体进行各项相关性能的分析。
同时，昭衍抗体发现平台也可通过对单细胞PCR，把同一细胞内天然配对的轻重链可变区（VH/VL）进行扩增之后，构建成ScFv库，再利用酵母展示的方法筛选抗原特异性单克隆抗体，或利用NGS测序技术获取抗体编码基因库。
从以上过程中，利用NGS技术来获得抗体编码基因尚有局限：单纯从抗体编码基因的信息，无法确认该抗体的一些生物学功能，比如说亲和力如何，特异性如何，是否能和细胞上天然蛋白结合等功能活性。要想获取这些信息，拿到抗体基因序列后必须进行基因合成并克隆到相应的表达载体中，利用体外重组表达技术表达单克隆抗体，然后再来进行筛选、功能确定。昭衍药物发现平台具备抗体制备平台，提供高通量抗体表达服务。
结合上篇（单B细胞筛选技术），总结说明：基于不同技术单个B细胞筛选，同时与单细胞测序、人工智能等技术的相互结合，是抗体发现主流趋势，并且不同技术会应用多种抗体开发上。此外，也需要了解抗体的开发是需综合各种学科、各方面考虑的系统化工程，单B细胞技术是一种高效、快速筛选抗原特异性B细胞以及对应的抗体leads，要想拿到理想的目标抗体，须从免疫原设计、免疫策略的设计、佐剂选择以及候选抗体的高效功能化筛选，抗体工程改造、细胞/动物水平药效验证等全盘考虑。
昭衍药物发现平台-Target-PCC
服务内容
治疗性抗体药物开发：
提供从靶点确认到抗体Leads筛选再到体内外功能、药效验证，交付最佳的PCC分子
蛋白/抗体制备服务
原核细胞、哺乳动物细胞等高通量表达
服务特点
一站式抗体发现服务
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