转自：纳微科技
重组促红细胞生成素（rhEPO）又称红细胞刺激因子，促红素是一种人体内源性糖蛋白激素，分子量36kd，等电点3.7~4.2。可刺激红细胞生成。用于治疗肾功能不全引起的贫血、获得性免疫缺陷综合征/艾滋病本身所致贫血或因治疗引起的贫血等贫血症状。
目前国内以CHO（中国仓鼠卵巢细胞）生产EPO的工艺为主，市面上相对成熟的纯化三步法有：1）蓝胶亲和层析-反相层析-离子交换层析；2）反相层析-离子交换层析-分子筛；3）蓝胶亲和层析-反相层析-分子筛。而EPO蛋白中的糖异构体的含量分布是影响安全性和有效性的重要因素。糖异构体的含量分布与纯化工艺有这紧密的联系，随着新产品的不断推陈出新，长效化技术也在进步，EPO市场份额逐渐变大，因此对纯化工艺也会提出更高的要求。
rhEPO 三步纯化工艺路线
纯化图谱：
纯化结果：
图1.SDS-PAGE纯化电泳图
电泳结果显示：UniGel-80Q 大量捕获rhEPO，再经过反相UniSil 30-300 C4去除宿主蛋白、内毒素等杂质；再用UniGel-80DEAE 低pH 洗杂，去除糖异构体；最后使用分子筛将培养上清中一部分与rhEPO疏水性、等电点极为接近的蛋白质去除。
图2.毛细管等电聚焦电泳图
毛细管等电聚焦电泳结果显示：纯化后的rhEPO 的异构体分布包括异构体3-8，体内活性＞10万IU其分布符合欧洲药典标准。
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