【原创】有关药品稳定性试验方案设计要点（干货汇总）

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1.1 引言

药物的稳定性是药品质量属性之一，是保护药物物理、化学、生物学和微生物学特性的能力。稳定性是相对的稳定，是一定时间内，一定条件下的质量变化在可接受范围内的稳定。药物稳定性研究即通过一系列的试验，确定药物稳定的范围，规范药品的包装、储存、运输和使用，以保证患者使用的药品的质量，实现药物的有效性和安全性。

1.2 稳定性研究

1.2.1 稳定性研究的内容

药物稳定研究也称稳定性试验，是贯穿于整个药品研发、临床、上市及上市后质量研究的重要内容，是产品有效期制定的依据，也是产品质量标准制定的基础。

1.2.2 稳定性研究的目的

稳定性试验的目的是考察原料药物或制剂在温度、湿度、光线的影响下随时间变化的规律，为药品的生产、包装、贮存、运输、使用等提供科学依据。

1.2.3 稳定性研究的类型

药物稳定性试验主要包括影响因素试验、加速试验和长期试验。对温度有要求的药物如冷藏、冷冻药物还需进行运输稳定性试验和冻融循环试验。对使用前需现配、复溶或多剂量包装开启后继续使用的制剂，根据药品属性和临床使用情况，执行使用稳定性试验，即配伍稳定性试验、开启后使用稳定性试验。

影响因素试验是考察各种极端因素如高温、高湿、光照、振动、氧化、酸碱等相关条件对产品的影响，影响因素试验包括高温试验、高湿试验、强光照射试验、反复冻融、低温试验、氧化试验、酸碱试验等。这种在极端条件下进行以达到药物降解的目的的，也称强降解试验或强力破坏试验。

加速试验是通过提高的温湿度，加速药物化学或物理变化，探讨药物的稳定性。中间试验是加速试验6个月期间发生“显著变化”，且长期试验条件是25℃±2℃时，需执行的试验。是在相对缓和的情况下进行的加速试验。

长期试验是在设定的贮存条件范围内进行，模拟上市产品的状态，在影响因素、加速试验结果以及气候带等其它因素综合考虑拟定包装形式、贮藏条件、复检期或货架期下进行的稳定性试验。

1.2.4 稳定性研究的基本要求

稳定性试验样品批次要求，其中原料药或制剂影响因素试验使用1个批次，如果试验结果不明确，则加试2个批次，生物制品直接使用3个批次。加速试验和长期试验使用3个批次。

稳定性试验样品生产规模要求，原料药样品要求合成工艺路线、方法、步骤与大生产一致。制剂样品应是放大试验产品，至少是中式规模，处方与工艺与大生产一致。具体批量要求根据品种、剂型、产品规定等制定，如大体积包装的制剂静脉输液，每批放大规模的批量应为各项试验所需总量的10倍。

稳定性试验中加速试验与长期试验所用样品包装应与拟上市产品一致。

稳定性试验中应使用专属性强、准确、精密、灵敏的药物分析方法和有关物质（如降解产物）的检查方法，应对方法进行适当的验证，以保证药物稳定性试验结果的可靠性。

1.3 本章小结

影响因素试验是在极端条件下进行，一方面了解药物对光、热、湿、酸碱、氧化等的敏感性，以此为据初步确定药品包装、加速试验和长期试验条件。另一方面是有助于确定药物可能的降解产物，帮助了解降解途径和分子内在的稳定性，全面掌握药品的有关物质，并据此确定药物的有关物质的检测项，开发检测方法，保证有关物质的分离度、灵敏度等。除此之外还是判断有关物质检查方法可行性的依据。

加速试验是在温湿度高于储存条件下进行，加速试验数据可用于初步外推药物的储存时限，为制剂处方、工艺设计、包装、运输、贮存、使用提供依据，为长期稳定性试验期限提供参考。另外，当药品储存、运输等短时偏离预设条件时，影响因素试验和加速稳定试验数据可作为评估该批次药品质量的依据。

长期稳定性试验则是按照预设的条件储存，是药品贮存条件和有效期制定的较为科学、合理和权威的依据。

2.1 原料药稳定性试验要求

2.1.1 影响因素试验[1]

原料药物影响因素试验是将样品分散放置于适宜的开口容器如称量瓶或培养皿中，厚度一般不宜超过3mm。

高温试验是将样品放置至少高于加速试验10℃的恒温设备中。通常设定0天、5天、10天、30天等取样检测。

高湿试验是将样品放置25℃，相对湿度90%±5%的恒湿密闭容器中10天，分别于5天和10天取样检测并称量试验前后样品重量，考察样品的吸湿潮解性。若吸湿增重5%以上，则在75%±5%条件，同法进行试验。

强光照射试验将样品放置适当光源如近紫外下，照度为4500lx±500lx下，光源总照度不低于1.2×106 lux·hr、近紫外等能量不低于200W·hr/m2，于5天和10天取样检测，需特别注意外观变化。

氧化试验、酸碱试验一般在分析方法验证中的强降解试验中进行，通常氧化条件使用1ml 3%过氧化氢溶液，强酸条件为1ml 0.05mol/L盐酸溶液，强碱条件为1ml 0.05mol/L氢氧化钠溶液。[2]

低温试验[3]是先于2～8℃放置2天，再在40℃放置2天，取样检测，如此循环3次；第3次循环后的样品放长期稳定性考察。

冻融试验[3]是先于-20℃～-10℃放置2天，再在40℃放置2天，取样检测，如此循环3次；第3次循环后的样品放长期稳定性考察。

2.1.2 加速试验[1]

加速试验是将样品在40℃±2℃、相对湿度75%±5%条件下放置6个月。通常在0月、3月、6月取样检测。当加速试验6月内发生“显著变化”且长期稳定试验温度条件是25℃±2℃时，需进行中间试验。中间试验条件是30℃±2℃、相对湿度65%±5%，考察时限通常为12个月，通常在0月、6月、9月、12月取样检测。

对温度敏感的药物，预计只能冷藏的，此种药物的加速试验，可在温度25℃±2℃、相对湿度60%±5%的条件下进行，通常考察时限为6个月。

对于拟冷冻储藏的，应在5℃±3℃或25±2℃条件下进行，以了解短期偏差预期储存条件对药物的影响。

2.1.3 长期试验[1]

长期试验一般是在25℃±2℃、相对湿度65%±5%或30℃±2℃、相对湿度65%±5%条件下进行的12个月或24个月或其它期限内的试验，通常前一年每3个月取样检测一次，第二年每6个月检测一次，而后每年检测一次。

对温度敏感的药物，长期试验可在5℃±3℃条件下12个月或24个月或其它期限内的试验，按要求取样检测。

对于拟冷冻储藏的，应在5℃±3℃或25±2℃条件下进行至少12个月的试验。

2.1.4 总结分析

本文阐述的是一般情况下药物稳定性试验需要考虑的方法和条件，是执行稳定性试验的仅供参考的答案而非标准答案。尤其是影响因素试验，除了一般情况下的高温高湿光照试验，更为重要的是基于具体药物性质、特点以及临床使用考量是否需要执行其它试验，如已有数据表明对在高温下很稳定的药物，可能就无需执行高温试验，用安瓿包装的的药物，因安瓿包装的非渗透性，可以无需执行高湿试验以及进行加速和长期试验中无需考虑湿度条件。或已有数据表明药物对高温稍有敏感，高温试验中可以降低温度、减少试验时间或增加取样点，在考虑药物特性的条件下进行，最大程度得出有参考价值的试验数据。

执行稳定性试验时，在结合药物特性的前提下，试验方法和试验条件的设计应源于试验目的，结果导向式的设计方案。当研究者要考察药物固有的稳定性时，需选择不带内包装的样品直接进行试验，而当研究者目的在于为药物选择合适的包装材料和储藏条件，这时的样品带包装才能证明包装对药品保护程度，从而选择合适的包装。加速试验和长期试验要求稳定性试验样品与拟上市销售产品具有同样的包装密封系统，必要时还应包括外包装与标签也是基于试验目的（模拟上市产品的储存，获得最真实可靠的数据，从而保证产品上市后的质量）而提出的要求。

稳定性试验中各方法样品数量与试验方法、试验考察项目、试验计划期限、预设取样检测次数等有关。然而稳定性试验方法、试验条件、考察项目的选择和稳定性考察期限等最根本上都与具体的产品有关。具体的样品数量、取样点、分析项目及标准需根据具体产品以及研究者对产品知识的掌握来拟定。一般情况下需先查找文献和相关资料，最大可能掌握原料药物的特性，基于对产品的了解评估并设计需要执行的影响因素试验，如高温高湿酸碱氧化等试验等。通过影响因素试验结果，初定加速试验和长期试验条件。试验样品数量建议不能低于整个实验过程全部用量的2倍[4]。通常情况尽可能多留，以满足试验临时变动的要求，如当发现某次取样检测结果有超趋势时，可适当加大检测频率，以及时发现问题。

试验应考察在贮藏过程中易发生变化的，可能影响药物质量、安全性和有效性的项目，应涵盖物理、化学、生物学、微生物学特性。原料药物通常考察性状（外观、旋光度或比旋度等）、pH、有关物质、对映异构体、晶型、粒度、水分、含量等。除此之外还应根据具体品种特性设置考察项目如无菌原料药应考察无菌，细菌内毒素。当一对对映异构体发挥无差别的药效作用时，即可无需考察对映异构体项。

本节汇总归纳一般情况下的原料药物稳定性试验各方法样品数量、取样点、试验考察项目及判定标准的要求（见表1）仅供参考。

▲ 表1-原料药物稳定性试验要求

2.2 药物制剂稳定性试验要求

2.2.1 影响因素试验

药物制剂的影响因素试验条件与原料药物基本相同。与原料药物不同的是药物制剂稳定性试验时，已掌握一部分原料药物稳定性数据，进而根据制剂目标质量概况进行处方筛选和工艺设计。影响因素试验即在该阶段进行，可被作为处方和工艺科学合理设计的评判依据。

2.2.2 加速试验

药物制剂的加速试验条件与原料药物也基本相同。除此之外，药物制剂试验条件的选择还需考虑剂型因素。如溶液剂、混悬剂、乳剂、注射剂等含水性介质可不考虑相对湿度。而乳剂、混悬剂、软膏剂、乳膏剂、糊剂、凝胶剂、眼膏剂、栓剂、气雾剂、泡腾片剂泡腾颗粒可直接采用温度30℃±2℃、相对湿度65%±5%条件下进行加速试验。包装在半渗透性容器中的药物制剂，如低密度聚乙烯制备的输液袋、塑料安瓿、眼用制剂容器等，则应在温度40℃±2℃、相对湿度25%±5%的条件下进行试验。

2.2.3 长期试验

药物制剂的长期试验条件与原料药也基本一致。但对于试验样品的包装要求比原料药物更为严格。除非有合理的说明，要求与拟上市产品具有相同的内外包装甚至是标签。而原料药物因包装规格较大，稳定性试验样品包装可采用模拟小包装，要求小包装所用材料与密封条件与大包装一致即可。

2.2.4 运输稳定性试验

部分药物制剂，应执行运输稳定性试验，充分考虑运输路线、交通工具、距离、时间、条件（温湿度，振动情况等）、产品内外包装、产品放置和温度监控情况等对产品质量的影响。

运输稳定性试验通常包括温度偏移研究即极端温度研究、温度循环研究和非温度影响因素研究即运输过程中受到的冲击、震动、空气压力或湿度变化等。表2是PDA TR53推荐的为温度研究和非温度研究的设计方案。3次温度循环试验后建议继续做长期，以评估对产品质量的影响。

▲ 表2-运输稳定性研究推荐方案[12]

2.2.5 使用稳定性试验

对于一些使用前需要配制、复溶，或在特殊环境如高原低压、海洋高盐雾等中使用的药物，还需执行使用稳定性研究。使用稳定性研究根据具体产品的使用情况执行。

粉针剂、小容量注射剂在临床使用需与其它输液配伍后使用，需要进行配伍稳定性试验，观察配伍后药物是否发生沉淀、聚集等，是否发生了主药与输液的相互反应以考察药物与输液配伍后的稳定性。配伍试验一般考察8h内样品的稳定性。通常情况下取样点设置在0.5h、1h、2h、3h、4h、6h、8h[5]。观察外观、形状，考察主药含量。需要注意的是，药物制剂经配伍后，主药含量很低，需采用检测灵敏度较高的仪器进行含量测定。

对于多剂量包装的药物制剂，在使用后会不可避免地接触空气、氧气、水分、光照等外界因素，它们可能影响含量、外观色泽甚至新的降解产品、使杂质量增加，尤其是重复打开使用和关闭可能导致微生物的污染、细菌繁殖。多剂量制剂使用后稳定试验应尽可能模拟实际的使用过程及使用时限，包括用法、用量以及试验样品的放置条件。如多剂量滴眼剂，模拟实际使用方法，拆包装，开瓶盖，模拟给药动作倒置、挤出一定滴数，每天3～4次，使用完成后盖上瓶盖，放置拟定的储存条件下。重复操作一定期限，取样检测。当预设该滴眼剂开启后使用时间为一个月时，则考察时间至少1个月，可在开启后、5d、10d、20d、30d[6]取样检测。当涉及功能性包装的多剂量药物制剂时，还应考察包装的功能性能，如喷雾剂需要考察使用时间和次数对喷头功能的影响。

2.2.6 总结分析

药物制剂稳定性试验考量基本与原料药物相同，但因药物制剂与原料药存在者本质的区别，制剂稳定性试验还需考虑制剂类型，包装类型以及临床使用的区别。考察项目和判定标准与原料药物的差异性最大，除此之外，药物制剂根据品种特性需执行使用稳定性试验。且因药品运输配送，路程远近不一、高低海拔交替、多次搬运或是遇到极端天气或恶劣环境对药品质量的未知影响，故运输稳定性试验也是尤为重要的。

使用稳定性试验可在长期稳定性试验中货架期末进行试验，以保证患者在购买近效期的药品，在开启使用或配制后产品仍然稳定。其考察指标一般与常规稳定性试验相同，同时应根据剂型品种设置特殊的考察指标，如对于配制后使用的注射液，应注意考察热原或细菌内毒素、无菌、不溶性微粒、颜色变化等。多剂量药物中往往含有抑菌剂、抗氧剂，需要考察使用期间抑菌剂和抗氧剂的含量变化，以直观反映药物多次使用期间的抑菌和抗氧性能，保证药物安全使用。

运输稳定性运输环境和设计应因地制宜，设想所有运输过程中可能发生的事件，模拟全过程，以保证患者使用的药品质量。

本节汇总归纳一般情况下药物制剂稳定性试验各方法样品数量、取样点、试验考察项目及判定标准的要求（见表2）仅供参考。

▲ 表3-药物制剂稳定性试验要求

▲ 表4-药物制剂稳定性重点考察项目参考表[1]

2.3 本章小结

中国药典2020版[1]，ICH Q1A[8]等稳定性试验指导原则均对稳定性试验条件进行了较为详细的阐述，但并没有关于试验条件和贮藏条件规定的衔接相关的内容。比如说一般情况下进行长期试验有两种的试验条件分别为25℃±2℃/60%RH±5%RH和30℃±2℃/65%RH±5%RH条件，这两种条件进行的试验输出的储藏条件是什么，是否有区别等均未在指导原则中找到相关的说明。据了解一般条件下进行的长期稳定性试验输出的储存条件均为常温贮藏（10℃-30℃），但25℃±2℃/60%RH±5%RH进行的长期稳定性试验输出储存条件为常温，在并未模拟真实储存情况下得出的结论有待考量。也有企业建议在25℃±2℃/60%RH±5%RH进行的长期稳定性试验输出储存条件应为25℃以下，而不是常温[9]。

一般长期试验条件是根据国际气候带计算的平均动力学温度MKT并推算湿度制定的，研究者据此用恒温法考察药品的稳定性。但近年来，国际气候变化较为显著，全球变暖，中国天气网报道称近10年来我国已进入极端暖湿格局。再者我国国土辽阔，南北温度差异大，南方夏季地表最高温度可达40℃以上，北方冬季最低温度可达-30℃甚至更低。中国气候变化蓝皮书（2022）[10]指出我国升温速率高于同期全球平均水平，是全球气候变化敏感区，高温、强降水等极端天气气候事件趋多、趋强。稳定性试验方案设计应充分考虑外界因素。

稳定性试验取样点以指导原则为参考，具体方案设计时需考虑产品差异。同时在执行试验过程中，某次试验数据偏离较多时，也可在下次取样检测之前再执行一次取样检测，以便尽早发现异常。除此之外也应考虑在近效期期间适当增加检测频率。

稳定性试验考察项目结合产品性质，剂型特征，使用情况制定。考察项目不只是局限于质量标准中的项目。同样也并非每个取样点都需全检，一般初始和结束时全检，中间阶段可评估选择执行部分项目考察，一般情况下含量和有关物质应重点考察，需每次检验。对于无菌产品，无菌性仅首次和末次检验即可，中间阶段产品可通过产品包装密封性来保证其无菌性。

3.1 稳定性试验要求

生物制品稳定性试验主要也包括影响因素试验、加速试验、长期试验、运输稳定性试验和使用稳定性试验等。试验样品通常包括原液、成品及产品自带的稀释液或重悬液等。稳定性试验条件在参考原料药物试验条件进而结合生物制品自身的敏感性可做适当的调整。取样时间通常比原料药物更为频繁。如果产品设定有效期在1年或1年以内，稳定性试验原则上应在前3个月每月取样检测一次，以后每3个月取样检测一次。如果产品的预定有效期在1年以上，稳定性试验原则上应在第1年每3个月取样检测一次，第2年每6个月取样检测一次，以后每年一次。但基于初步的稳定试验结果，可有针对性地对产品变化剧烈的时间段进行更密集的检测或是在相对稳定的时间段内适当加大检测频率。加速试验和影响因素试验尽量做到尽可能观察到产品的不合格。

生物制品稳定性试验评价指标较为复杂，应根据品种的成分特性开展稳定性试验工作。通常情况下，生物活性/效价测定是稳定性试验的关键指标。在产品纯度允许、有效成分明确的情况下，应尽量使用适当的理化、免疫化学方法对生物制品的活性成分进行定量检测。如产品允许，通常建议稳定试验中考察生物学活性/效价、纯度、含量、外观、可见异物、不溶性微粒、pH值、水分和无菌等以确保能反应产品的稳定性特征。

3.2 本章小结

由于生物制品对温度、湿度、光照等环境因素更为敏感以及生物制品的复杂性，其稳定性试验设计相比于化学原料药物和制剂比更具有“产品论”的特点。对于生物制品，很难用单一的稳定性试验分析方法或参数来反映生物制品稳定性特征的全貌。对于一些特殊的品种如基因治疗和细胞治疗类产品等，还应根据产品特点开展相应的研究。

4.1 稳定性试验设计考量

药物稳定性试验设计时，最为重要的是基于试验目的设计。不同阶段以及对产品知识掌握的程度都会影响试验方案设计。研发初期执行的稳定性试验属于探索性试验，试验过程中应留足够的灵活变动的空间，以达到试验目的。而以注册为目的的稳定性试验更多的是验证性试验，试验条件准备足够充分，方案设计足够完善，按部就班进行，以证明产品的稳定性以满足申报要求。产品上市后进行的稳定性试验属于是监控性试验，用于监控已上市产品在效期内的稳定性，保证已上市产品的质量。

稳定性试验方案设计时需考虑产品属性、产品剂型和包装、气候带、产品市场布局以及特殊使用方式等其它因素。

4.1.1 产品属性

药物结构决定其性质。相比于中药的成分复杂，大分子生物药结构的复杂性，小分子化学药在基于前人较为成熟的研究的基础下，各种稳定性试验方法，考察项目都较为完善。尽管如此，稳定性试验方案设计仍需以具体产品为主导，围绕产品展开相关试验。对于仿制药，尽管已有上市产品且已有稳定性数据，因仿制厂家与原研必然存在着或多或少的物料，处方工艺，质量管理等各方面的差异，仿制厂家仍需进行稳定性试验以确保其产品的质量。

4.1.2 剂型和包装

稳定性试验考察指标与产品剂型关系密切，具体参见本文表4。通常制剂产品稳定性试验时通常包括内包装，制剂与包材的吸附、浸出作用也不可忽略，故稳定性试验时也应考虑包材的相容性。另外包装在非渗透容器中的制剂可不考虑药物的湿敏感性或可能的溶剂损失。而包装在非渗透性容器中的制剂应考察潜在的失水性。

4.1.3 气候因素

常温储存药物在选择长期稳定性试验条件应根据拟上市国家气候带制定，详见表5。中国总体来说属于亚热带，部分地区属湿热带，故长期试验采用25℃/60%RH或30℃/65%RH[1]。但在我国上市的药品在全国范围内都有可能流转，仅单独选择性其一试验条件，并未涵盖药品实际的储存和销售情况，可能会出现在效期内不合格的情况，故在选择长期试验条件应充分评估气候因素，制定试验条件。

▲ 表5-国际气候带分区和相应的长期稳定性试验条件[1][11]

4.1.4 市场因素

考虑药品拟上市国家，一方面要考虑目标国家的所处气候带，另一方面需要掌握目标国家药监部门对稳定性试验的要求，申报资料中应包含的稳定性试验数据时限的要求以及稳定性试验样品批次的要求。如ICH要求至少提供三个批次的样品稳定性试验资料且生产工艺应模拟上市产品，其中两批至少在中式规模下生产，一批可在较小规模下生产且生产不同批次的制剂尽量采用不同批号的原料药。

4.1.5 其它因素

稳定性试验还需考虑产品特殊临床应用执行配伍稳定性或开封后稳定性试验。

4.2 结束语

稳定性试验设计应充分考虑各类因素的影响，基于目的设计试验，具体产品具体分析。稳定性试验时应避免其它因素对考察对象的影响。如光照试验时，应避免光照引起的温度升高的问题。高温试验时应考虑包装材料与产品的相互作用造成的误导性的结果。

产品有效期和储存条件是稳定性试验最重要的输出结果。我国药企制定产品有效期时，多数是都是依据长期试验各考察项目在期限内符合标准从而直观得出有效期。为保证有效期内药物的有效，企业会考虑执行稳定性试验时间长于有效期，增加有效期数据的可靠性。但建议企业结合使用数据统计分析方法，考虑药物初始含量，批次之间杂质水平的变异程度，使充分合理设计的稳定性试验在科学合理的评判标准下获得可靠的产品有效期。

参考文献

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